De ATP-bepaling

De verontreiniging van een oppervlak wordt gemeten door de hoeveelheid ATP die erop aanwezig is te meten. Een hygienemeting.
Hierbij wordt gebruik gemaakt van het enzym luciferase geïsoleerd uit het vuurvliegje  dat het substraat luciferine oxideert en daarbij licht uitzendt.
Deze reactie vereist de aanwezigheid van ATP. 

ATP + O2 + luciferine  ®  ADP + oxyluciferine + licht

Hoe meer ATP, hoe meer licht!

Voegt men dus aan een monster het luciferine en het luciferase toe en meet men daarbij de hoeveelheid licht, dan is na te gaan hoeveel ATP er in het monster zit.

De methode is niet erg gevoelig , er moeten wel100.000 micro-organismen aanwezig zijn om iets te kunnen meten.

Het is wel een zeer snelle methode ! Binnen een minuut is er een uitslag. Vergelijk dit eens met andere levendtellingen!

Het is geen kwantitatieve methode om micro-organismen echt te tellen want: er wordt ook ATP gemeten van andere levende cellen! zoals van voedselresten zijn of door afdruk van handen. Voor hygiënemetingen is dit bezwaar niet zo groot. Voedselresten mogen na schoonmaken ook niet aanwezig zijn, ze vormen een groeimogelijkheid voor micro-organismen en zijn dus ongewenst. 

Wil men alleen prokaryoot (bacterie)DNA bepalen, dan is dat zelfs ook mogelijk, er moet dan aan het monster als voorbehandeling een enzym (somase) toegevoegd worden dat alle eukaryote ATP afbreekt.

Om een oppervlak op ATP te onderzoeken moet het oppervlak met een steriel (ATP vrij)wattenstaafje worden afgestreken, het watje wordt in een buis met (ATP vrij) water gebracht en het dan natte watje goed "uitgeperst" waarna de achterblijvende vloeistof wordt onderzocht door Luciferine en luciferase toe te voegen en het ontstane licht te meten in een instrument (bijvoorbeeld met de  Hy-lite of de SystemSURE II  , voor de laatste zie ook de demo)
 

Hy-RISE

Een alternatief voor het aantonen van verontreinigde oppervlaktes is de Hy-RiSE test.
Hierbij wordt op een strip NADH aangetoond, net als ATP een biomolecuul volop aanwezig in de cellen van alle organismen.
Dit NADH wordt aangetoond door een substraat en een enzym toe te voegen die uitsluitend met NADH een paars gekleurde stof vormen.
In principe een soort enzymatische bepaling, voor het aflezen is geen instrument nodig.

Omhoog